反相色谱
1、正相色谱基本上可以被看做是液固吸附色谱，其柱填料是吸附剂，其表面上分布有活性吸附位点，溶剂和溶质分子均能被吸附于活性位点上。由于相互作用力有大有小，溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附，从而造成了在柱内保留时间的差异，使不同物质得到分离。
应用特点：正相色谱一般用来分离中性化合物和离子(或可电离的)化合物，而且以中性样品为主。适于分离样品如下：
①对于反相色谱法很难分离的异构体，可以采用以硅胶为固定相的正相色谱分离分析；
②根据被分离样品极性差别进行族类分离；
③易于水解样品的分离分析；
④分离分析高脂溶性样品，其在极性有机溶剂中溶解度很小；
⑤正相色谱也可以用于异构体分离(包括几何异构体和光学异构体)。
2、流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛，现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。反相介质性能稳定。分离效率高，可分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸等含有非极性基团的各种物质。
应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，可分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物质。
扩展资料
原理：
反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。
与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。因此，必须用极性有机溶剂(如甲醇、乙腈等)或其水溶液进行溶质的洗脱分离。
溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。
RPC主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。
由于反相介质表面为强烈疏水性，并且流动相为低极性的有机溶剂，生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活，所以，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。
参考资料来源：百度百科-正相色谱
参考资料来源：百度百科-反相色谱
在液-固吸附色谱,，液-液分配色谱这两种液相色谱中才涉及到正相色谱及反相色谱。液-固吸附色谱（固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相是吸附作用差异来分离的。吸附作用越强，K值越大，保留时间越长）液-液分配色谱（是将固定液涂在担体上作为固定相的，它的分离原理与液液萃取的原理相同，从而服从分配定律。在固定液中溶解度大，K值大，保留时间长）。
正相色谱是指流动相的极性小于固定相的极性；反正色谱是指流动相的极性大于固定相的极性。
对于反相色谱，极性越小的物质，流动相的极性越大，保留时间越长。极性越小的物质，流动相的极性越小，保留时间越短。对于极性大的物质来说，流动相的极性对其保留时间影响较小。而正相色谱正好相反。
因此在应用上正相色谱用于分离极性较大的物质，如蛋白质、生物碱等。反相色谱多用于分离极性较小的物质，在流动相的选择上，反相色谱的优势更大，在实际工作中反相色谱的应用更为广泛
流动相极性＞固定相极性- 反相色谱
流动相极性＜固定相极性- 正相色谱
一、吸附色谱（adsorption chromatography）
又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。
分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。
固定相： 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。
流动相： 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。
应用： 对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。
缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。
二、分配色谱
原理： 固定液机械的吸附在惰性载体上，样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同，分别进入两相分配而实现分离。
固定相：将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。如全多孔微粒硅胶吸附剂。
根据极性不同分类：正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液；流动相是非极性溶剂；可分离极性较强的水溶性样品；弱极性组分先洗脱出来。
反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液；流动相是极性溶剂；强极性组分先洗脱出来。
液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，且不能进行梯度洗脱，已经不大为人们所采用。
三、键合相色谱
考虑分配色谱法中固定液的缺点，因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上，固定相就不会溶解到流动相中去了。
键合固定相优点：1、对极性有机溶剂有良好的化学稳定性
2、使色谱柱的柱效高、寿命长
3、实验重现性好
4、几乎适于各种类相的有机化合物的分离，尤其是k’宽范围的样品
5、可以梯度洗脱
根据极性不同分类：
正相键合相色谱—固定相极性＞流动相极性
固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。
适于分离脂荣、水溶性的极性、强极性化合物
反相键合相色谱—固定相极性＜流动相极性
固定相：烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的ODS柱或C18柱就是最典型的代表，其极性很小。
适于分离非机性、弱极性离子型样品，是当今液相色谱的最主要分离模式。
正相HPLC（normal phase HPLC）：
是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。
反相HPLC（reversed phase HPLC）：
由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱，Octa Decyltrichloro Silane)，代表性的流动相是
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什么叫正相色谱?什么叫反相色谱?各适用于分离哪些化合物?
答：什么叫正相色谱?什么叫反相色谱?各适用于分离哪些化合物?介绍如下：正相色谱基本上可以看作液固吸附色谱。其柱填料为吸附剂，表面有活性吸附点。溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心。反相色谱是流动相极性大于固定相极性的色谱。反相色谱的应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，它能分离蛋白质、肽、...
何谓反相液相色谱?何谓正相液相色谱?分别试用于分析什么样的样品?_百 ...
答：由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。相反，反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。正相色谱的流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出；反相色谱的流出顺序正好相反。[1]另外，其他有些色谱 如柱色谱也有正反相之分 ...
在液相色谱法中,为什么可分为正相色谱和反相色谱?各有什么含义?_百度...
答：采用正相及反相色谱是为了降低固定液在流动相中的溶解度从而避免固定液的流失。当使用亲水性固定液时常采用疏水性流动相，及流动相的极性小于固定液的极性，成为正相液色谱，反之则是反相液液色谱
什么是反相液相色谱?按极性,化合物流出顺序如何
答：液液分配色谱是液相色谱的分离机制之一，它的正相和反相是按固定相和流动相的极性大小确定的，如果固定相的极性大于流动相的极性则是正相色谱，反之，如果固定相极性小于流动相极性则属于反相色谱。分配色谱的分离原理：利用被分离组分在固定相与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数差别而被分离。易溶于...
反相色谱的概念
答：反相色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定,保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增大,对于非极性化合物通常遵循以下规则:(弱)非键合硅胶 << 氰基 < C1(TMS) < C3 < C4 < 苯基 < C8 ≈ C18(强).溶质保留值与固定相表面积成正比,普通载体(80�0�3)的表面积约为...
为什么反相色谱比正相色谱用得更多?
答：本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明： \x0d\x0a1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。 \x0d\x0a由于...
什么是正相分配色谱和反相分配色谱?
答：正相色谱法：当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；反相色谱法：当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的...
为什么色谱柱分为正相柱和反相柱?
答：一、固定相不同 正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。非极性色谱柱：常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。极性色谱柱：通常为硅胶（Silica）以及其他具有...
请问一下什么叫做反相色谱?常有的高效液相色谱是属于哪个类型的?_百度...
答：反相色谱中，固定相非极性，流动相极性。典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。硅醇基与洗脱物的极性基团作用。因此，...
正相色谱和反相色谱的区别是什么?
答：天然产物，都可以在反相体系中得到有效分离。3、流动相不同：正相色谱，因为硅胶表面的硅羟基极性大，极性大的水溶性化合物很难被洗脱下来，只有使用更强极性的溶剂才能成功。在反相色谱中，因为极性化合物和固定相的吸附性较小，因此用较小极性的溶剂，就可以实现比较理想的洗脱效果。
