如何用流式细胞仪检测细胞凋亡?

~ 细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。为您介绍流式在检测凋亡方面的应用。
在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激活，磷脂酰丝氨酸外翻，这时细胞的形态已经发生了改变，可以看到细胞变小，胞核皱缩；最后是细胞内DNA断裂，形成凋亡小体。
在凋亡发生的各个过程当中，都有相应的流式细胞仪的检测方法，可以采用以下检测方法：
1、线粒体功能
2、DNA Cycle
3、Caspases
4、Annexin V Assay
5、DNA Fragmentation Assays
基本上涵盖了细胞凋亡的各个期，对各种检测方法的原理和特点做一个简单介绍。
线粒体功能检测的试剂盒有深圳达科为公司代理的试剂盒（产品编号为BVK250）和BD公司出售的盒Apo-Alert试剂盒。其检测主要采用阳离子型荧光染料。
原理是：正常细胞中，染料可以在线粒体内聚集，发出明亮的红色荧光；而细胞凋亡后，其线粒体膜电位发生改变，染料无法进入线粒体，只能在胞质中以单体形式存在，发出绿色的荧光。可以在荧光显微镜下，或流式检测。采用488nm激发，其检测波长分别是527nm和590nm。整个实验过程操作简单，只需要30min就可以见到结果。
Caspase家族可以检测的分子非常多，也有不少商业的试剂盒可以应用。即使没有相应的试剂盒，只要有相应抗体基本上是可以检测的，具体的方法是参照细胞内蛋白检测的步骤。
在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变，细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中，细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35-36KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时，可以和外翻的PS结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻，因而也会阳性。因此，常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外，还会加一种DNA染料，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和DNA结合，从而可以发荧光，区分出死细胞。
在采用Annixin V方法检测凋亡细胞时，要特别强调一点：该方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，从而影响检测结果。尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检测。因为其重复性较差，且需要操作时非常小心。
DNA周期检测原本是用来反应细胞各个期，即细胞增殖状况的。利用细胞内DNA能够和荧光染料，如PI结合的特性。细胞各个时期由于其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式检测的荧光轻度也不一样。G2-M期DNA含量是G0-G1的两倍，而S期介于两者之间。
但是由于发现凋亡的细胞DNA含量较少，因而可以在细胞G0-G1期前面有一个亚二倍体峰，从而认为是凋亡细胞。但是由于死亡的细胞本身其DNA含量也是减少的，因而非常难于区分凋亡和死亡的细胞。在90年代，该方法曾经风靡一时，现在看来，那时的实验结果需要推敲。尽管，经典的流式检测资料给出的图是认为凋亡的细胞是紧挨着G0-G1期峰的一个峰，死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远，但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法，完全可以不用这种方法。
晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测，其检测原理与经典Tunel原理基本一致。
以BD公司的为例，其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。但是由于在细胞内标记，细胞需要进行固定处理，操作类似免疫组织化学法，容易造成假阳性。建议采用原装大厂的试剂盒，并且严格的设立对照。经过预实验方法稳定后再进行大规模实验。标本处理后，均可以用荧光纤维镜进行观察，拍照。流式检测后，可以进行精确的计算凋亡百分比。这一点，经典TUNEl是做不到的。

流式细胞仪检测细胞凋亡需要多少体积的细胞
答：6.用1ml　PI染液染色,4℃避光30

流式细胞仪检测细胞凋亡需要多少体积的细胞?
答：6. 用1ml　PI染液染色，4℃避光30 min……欢迎采纳！！

如何用流式细胞仪检测细胞凋亡?
答：细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。为您介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激...

如何用流式检测细胞凋亡
答：一、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine, PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。图3：凋亡早期 PS从细胞膜的内侧外翻 该方法简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细...

流式图四个象限怎么看凋亡
答：需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。相关分析 使用流式细胞仪正确分析Annexin V-FITC/PI双染的细胞前...

bd的流式细胞仪器测凋亡怎么操作
答：检测凋亡的流式方法很多，就算是BD的机子，型号也很多，所以操作差别很大。不过原则都是一样的。先用未染色的细胞设置gate，然后根据染色的强弱，来判断凋亡的多少 以下是目前常用的流式细胞仪检测凋亡的方法，你根据自己试验细胞的不同来选取：

如何用流式检测小鼠外周血中T细胞的凋亡
答：4℃)固定12小时以上，用PBS洗去乙醇，加入0.5ml柠檬酸-磷酸缓冲液(pH 7.8)室温作用5分钟，离心后以PBS重悬细胞，加入 RNaseA (终浓度60μg/ml)37℃作用30分钟，再加入碘化乙锭(PI，终浓度50μg/ml)4℃暗染30分钟，以染细胞内总DNA，用流式细胞仪分析正常细胞和凋亡细胞，计算凋亡率。

PC12细胞活力及凋亡检测方法(MTT、流式、细胞爬片HE、免疫组化protocol...
答：用于后续步骤的处理 PC12细胞培养与接种 在37℃ CO2培养箱中，使用含血清的培养基培养PC12细胞，确保细胞稳定生长。当进行检测前，将细胞传代至96孔或6孔培养板，以便于后续的MTT和流式细胞仪实验。细胞活力与凋亡检测 MTT活力评估</: 100 μl细胞接种在96孔板中，待孵育后，通过测量吸光值...

流式细胞仪检测细胞凋亡,单染可以检测出细胞凋亡率吗?
答：用PI单染就可以，PI是用来测细胞周期的，在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡，但是这个方法不是很好，坏死细胞也会包含在内。准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例。建议用AnexinV和PI双染，PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞。细胞早期凋亡时，内膜外翻，位于胞浆的...

请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么?
答：将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用...