微生物计数方法有哪些？
微生物的显微直接计数法
一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）
三、实验器材
1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。
2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、实验方法
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
五、实验作业：
将实验结果填入下表中：
计数次数 每个大方格菌数 稀 释
倍 数 试管斜面中的总菌数 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
活菌测量有血球计数板，此外还有细胞称重法
测定微生物细胞数目的方法有很多，介绍几种1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。
②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。
此法也是统计样品中活菌的数目。
4.比浊法
原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数，我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样，可以有两种情况。
另外，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。
推荐一种高级仪器：流式细胞仪。流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。原理：待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。
应用：可用于细胞、微生物的研究，研究包括：细胞生理学研究、细胞膜表面标记、胞内标记、细胞周期分析、凋亡分析、分选；细菌大小、总数量、死活数量级比例、等电点等信息都可反映出来。
流式细胞仪结果精确，方便快捷，但实验成本较高，有条件的可以考虑。
听我的这个课程我今天刚刚上的，微生物计数方法有这些
1显微镜直接计数法
2平板菌落计数法
3比浊法
4细胞干重法
5含氮量法
稀释涂布平板法 显微镜直接计数法
有平板计数法。血球计数法。比浊法。
微生物计数方法有哪些
答：1.血细胞计数法 将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化 2.稀释涂布...
微生物计数的方法有哪些?
答：1、取样器取样法是用来调查土壤小动物的种类时的取样方法；2、目测估计法和记名统计法 是调查土壤小动物的时候 具体计数的方法.一个准确一个模糊；3、显微计数法 是在显微镜下观察并计算某种微生物的数量的方法；4、稀释涂布平板法是用稀释后 在培养基上形成 菌落的方法来计算 细菌等微生物的数量的方...
测定微生物的生物量有哪些主要方法
答：1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板；或者用电子计数器计数 2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度 3.核酸计数法 荧光定量PCR技术 4.活菌计数法 MPN和平板计数法 由于测定方法的限制,前几种计数结果不太准确,...
我们有什么办法测量微生物生物量
答：1. 直接计数测定 根据微生物种类，有血球计数板和细菌计数板；或者用电子计数器计数 2. 比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比，可以用分光光度计测OD值，用OD值表示样品菌液浓度 3. 核酸计数法 荧光定量PCR技术 4. 活菌计数法 MPN和平板计数法 由于测定方法的限制，前几种计数结果...
测定微生物数量的常用方法有哪些
答：测定微生物数量的常用方法有血细胞计数法，稀释涂布平板法，滤膜法，比浊法，显微镜直接计数法。血细胞计数法是将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。稀释涂布平板法原理：每个活细菌在适宜的培养基和...
测定微生物的生长量常用的方法有
答：测定微生物的生长量常用的方法有：血球计数、染色计数、比例计数试、剂纸计数等。一、血球计数 血球计数是具有特殊的结构尺度和厚度玻璃片。玻璃上有四个凹槽和两个脊，中间有一个短横凹槽和两个平台，两个脊的表面比两个平台的表面高0.1毫米。每个平台都刻有不同规格的格子，在中心0.1平方毫米的...
高中测定微生物数量的方法
答：一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的...
菌落计数有哪些的方法
答：测定微生物细胞数目方法有多介绍几种 1.血细胞计数法 稀释菌液样品滴血细胞计数板上显微镜下计算4~5格细菌数并求出每小格所含细菌平均数再此依据估算总菌数 ①此法缺点能区分死菌和活菌 ②对压小方格界线上细菌应当取平均值计数 ③此法用于测定培养液酵母菌种群数量变化 2.稀释涂布平板法 原理：...
微生物生长的测定方法中()为活菌计数法。
答：微生物生长的测定方法中（）为活菌计数法。A.血球计数板计数法 B.平板菌落计数法 C.比浊法 D.干重法 正确答案：B
高中生物几个计数法。
答：1. 取样器取样法是针对土壤小动物种类调查的一种取样手段；2. 在土壤小动物研究中，目测估计法和记名统计法是两种不同的计数方法，前者提供的是模糊估计，后者则相对准确；3. 显微计数法是在显微镜辅助下，对微生物数量进行精确计算的技术；4. 稀释涂布平板法通过将微生物稀释后涂布在培养基上，根据...
