高效液相色谱在分子生物学中的作用
1、溶剂输送系统；储液器，用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器，脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。
输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。
2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。
3、分离系统；色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响到分离的效果。
4、检测系统；检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。
5、数据处理和记录系统；对色谱数据进行处理，并参与HPLC仪器的自动控制。
扩展资料
与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
参考资料来源：百度百科——高效液相色谱仪
1、溶剂输送系统；储液器，用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器，脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。
输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。
2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。
3、分离系统；色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响到分离的效果。
4、检测系统；检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。
5、数据处理和记录系统；对色谱数据进行处理，并参与HPLC仪器的自动控制。
扩展资料
与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
参考资料来源：百度百科——高效液相色谱仪
【摘要】HPLC是目前生物分析中应用最广泛、发展最迅速的一种分析方法，但由于生物样品组分复杂、仪器缺陷，HPLC的应用受到诸多限制。
【关键词】HPLC 生物分析
【引言】 HPLC是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。随着HPLC这一种分类分析技术的广泛应用，现在每天都有色谱工作者在研究使用HPLC。
【正文】
1 HPLC的发展简史
HPLC的发展始于20世纪60年代中后期，在经典液相柱色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术，应用于液相柱色谱系统的设计，同时机械、光学和电子等技术上的进步，也促使了HPLC的发展。20世纪70年代，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。20世纪80年代新一代是智能色谱仪，能在12到24小时完成人们一周或一月的劳动目前HPLC已成为化学、药学、医学、生物化学、环保等科学领域中重要的分类分析技术，HPLC已广泛开展和应用，各大学、研究所和工厂的试验室中，它已作为一种常备仪器使用。
2 HPLC的分类
吸附色谱
分配色谱
离子色谱
体积排阻色谱
亲和色谱
3 HPLC方法建立的步骤
了解样品的性质，明确分离目的。
是否需要特殊的HPLC步骤、样品预处理等。
选择检测器和检测器设置
选择液相色谱法；进行预实验；估计最佳分离条件
优化分离条件
检测出现的问题或所需的特殊步骤
论证方法使之进入常规实验室
4 HPLC在生物分析中的应用
HPLC在药物分析中的应用
HPLC是目前生物样品药物分析中应用广泛、发展迅速的一种分析方法，但由于生物样品组分复杂，特别是含大量蛋白质等大分子杂质，易引起柱头堵塞而升高柱压；另外试样中药物浓度较低，需进一步富集才能检出，都需要对试样进行适当的前处理，以使药物净化、富集。通常的方法是进行液液萃取，但存在诸如易产生乳化、杂质较多、回收率低、需要的样品量大等缺点。固相萃取是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理，使液体样品通过一吸附剂，保留其中某一组分，再选用适当溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目的作为从生物样品中提取净化微量药物或其代谢产物的新方法，己被广泛地用于生物样品的检测中，其中尤以与技术结合用于生物样品的分析引人注目。
生物检测
Raggi等 报道用SPE-HPLC 同时测定人血浆中氯氮平和其活性代谢物去甲氯氮平的含量，两者的绝对回收率均高于88%，优于其他方法，检测限为1ng/ml
Lacroix 等 建立了SPE-HPLC荧光检测法测定人血浆中的神经肌阻滞剂Mivacurium Chloride对映异构体及其代谢物，其检测灵敏度可达3.9ng/ml 。Moriyama 等 用C18 柱，仅用20ul血浆，同时测定抗癫痫药扑米酮及其活性代谢物苯乙基丙二酰和苯巴比妥。谭力等 建立了SPE-HPLC 测定依那普利血药浓度的方法，最低检测浓度为1.5ng/ml,Lu 等用SPE-HPLC 荧光检测法测定了血浆中痕量甲氨蝶呤和羟甲氨蝶呤，甲氨蝶呤的最低检出限为0.05ng/ml。Farin等用SPE-HPLC 检测人血浆中美洛哌平的含量，其检测限为0.02ug/ml 。由于美洛哌平的pH 快速变质而要求Ph4.5以上，而在这样的pH 条件下将导致蛋白质的不完全沉淀，增加柱压和污染柱子，必须在制样后1h 内进行HPLC检测。而用SPE ，因没有低的 pH条件限制，可以避免制样后须快速进样分析的限制。
HPLC法在四环类抗生素质控分析中的应用
据文献报道，通用的四环类抗生素的色谱分析体系为反相色谱系统，流动相可概括为碱性流动相(Ph>7.5)和酸性流动相(Ph<2.5)。由于反相色谱填料在偏碱性条件下硅胶颗粒易溶解；在偏酸性条件下键合相易水解。故对四环类抗生素一直未采用HPLC法进行质量控制。近年来，伴随着色谱填料的发展，键合硅胶抗酸、碱的能力大大提高，得采用HPLC法控制四环类抗生素的产品质量成为可能。经比较，碱性流动相体系较酸性流动相体系更易得到较好的分析结果。四环素类抗生素为碱性抗生素，与硅胶填料上的硅醇基的相互作用较强，色谱峰易拖尾。故对不同牌号的色谱柱，由于填料封尾情况的差异，对其色谱峰形的影响不同，采用全封尾的色谱填料，如Kromasil C18等易得到较对称的色谱峰。
【小结】
高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色谱柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集、适用范围广和安全。同时随着机械、光学和电子、计算机等技术上的进步，高效液相色谱法将得到极大发展，适用范围也将越来越广。生物科学的发展也离不开HPLC。
【参考文献】高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用气象 北京 2001
NULL 分析化学 大连理工大学出版社 2004
张玉奎等译 实用高效液相色谱法的建立 华文出版社 北京 2001
何 华 倪坤仪 主编 现代色谱分析 化学工业出版社 北京 2004
王新春 阳长明 侯世祥 李章万 中国医院药学杂志 2001年第 21卷第 12期
高效液相色谱仪的发展现状与前景分析
答：这样可以发挥各检测器的优点,实现在-次色谱进样分析中得到更多、更准确的信息。20世纪80年代后科学家们开发出了液相色谱与质谱、电感藕合等离子体发射光谱、傅里叶变换红外光谱原子吸收光谱核磁共振谱等联用技术。这对于仅限于单一检测的高效液相色谱仪来说，也是一个新的挑战和研究点。就高效液相色谱仪器...
确诊帕金森的必要条件是什么?
答：帕金森病的诊断包括以下几方面：1、临床症状：帕金森病起病隐匿，发展缓慢，多由单侧肢体发病，进而累及对侧肢体，最终发展至中轴线，出现转身平衡障碍；2、药物反应：对补充神经递质的药物反应良好；3、影像学检查：PET-CT、核磁共振等；4、病理检查：是确诊帕金森病的重要手段，但目前应用较少；...
常用的基因突变检测方法有哪些
答：基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。4、高效液相色谱法 该方法是基于发生错配的杂合双链DNA与完全匹配的纯合双链DNA解链特征的差异而进行检测的，可检测出含有单个碱基的置换、插入或缺失的异源双链片段。与测序法相比，该法简单、快速，...
高效液相色谱的原理
答：在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或...
多巴丝肼胶囊药物分析
答：本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对多巴丝肼胶囊中的主要成分左旋多巴（C9H11NO4）和盐酸苄丝肼（C10H15N3O5·HCl）进行定量分析。这种方法适用于多巴丝肼胶囊的药物检测。方法原理基于将供试品溶解后，通过高效液相色谱仪进行分离，利用紫外吸收检测器在220nm波长下测定左旋多巴和盐酸苄丝肼的吸光度。
纯水机出的一级水,二级水,三级水有什么区别
答：1、水的电阻率不同：一级水电阻率>18MΩ.cm；二级水电阻率>1MΩ.cm；三级水电阻率>0.05MΩ.cm 2、用途不同：一级水用于高效液相色谱（HPLC）气相色谱（GC）原子吸收（AA）电感耦合等离子体光谱（ICP）电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分子生物学实验和细胞培养等。二级水用于制备常用试剂溶液、...
高效液相色谱分析法的原理是什么?
答：（二）高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，...
多肽和蛋白质类药物的分析方法
答：高效液相偶联同位素在线检测系统。这种方法将HPLC的高度分析分离行为和同位素的高灵敏度检测结合在一起。使得药物的分析分离更加直观和方便。特别在蛋白质多肽类药物药动学方面体现了其独特的优点。1.4 色谱法1.4.1 HPLC 在进行普通药物动力学研究中,HPLC是技术成熟,应用广 泛的分析手段。在蛋 白多肽药物的实验研究或...
请教关于糖基化程度的分析方法
答：需要高超的实验技巧和较多的蛋白质，且无法处理N－端封闭的蛋白质。因此，随着质谱技术的发展，此法已不在被广泛使用。核磁共振技术也可用于糖基化氨基酸位点的鉴定。这种方法可在液态溶液中直接进行蛋白质结构测定。糖链结构的鉴定也采用质谱技术、毛细管电泳技术、气相色谱技术及凝集素亲和技术。
请说明下液相色谱的原理以及操作时候的注意点
答：对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70～80%。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性...
