请帮忙介绍高效液相色谱原理

高效液相色谱法的原理是什么？~

液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪，具有常规HPLC的基本性能，并扩展了更多智能化的功能，能很好的满足用户的各类不同的应用要求，使用户能更加轻松的使用，并获得准确的分析数据。
一、原理：
高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论，色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成，造成的结果就是色谱柱的柱效远远高于原始的经典液相色谐，它柱子使用后还能具有高度灵敏度检测器。能够对流出来的分析物进行连续检测。
色谱仪是利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、分配或吸附等化学作用性能的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。高效色谱仪在食品分析、环境分析、生命科学、医学检验和无机分析等领域得到广泛使用。-般来说，80%~85%的有机物原则上可采用高效液相色诸仪分析。

1、采用高效液相色谱(HPLC)法分离单糖和寡糖，较多采用氨基柱，乙腈和水作为流动相，此法具有完全分离麦汁、发酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和麦芽三糖的优点。 本文采用HypersilNH2柱分析麦汁、发酵液和啤酒中三糖以内的可发酵糖。至今尚未见到采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离测定啤酒中的各种有机酸的报道，本文采用直接RP-HPLC法，应用NucleosilC18柱，测定啤酒、发醇液和麦汁中的草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸等有机酸。 2、实验部分 2.1 药品和试剂葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖、木糖、草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸氢二钾药品均为分析纯，乙腈为色谱纯。 2.2 仪器与色谱条件PE200系列高效液相色谱仪(PE公司)；PE200系列泵，ISS200自动进样器，PE101柱炉。 (1) 可发酵糖色谱柱：预柱PEPEEK-C184.6mm×10，分析柱Hypersil5μmNH24.6mm×250；柱温：30℃；示差折光检测器；流动相：重蒸＋水，流速1mL/min，进样量均为10μL。 (2) 有机酸色谱柱：预柱PEPEEK-C184.6mm×10，分析柱Nucleosil5μmC184.6mm×250；柱温：18℃；二极管阵列检测器检测波长215nm；流动相：0.1mol/L磷酸氢二钾，流速0.8mL/min，进样量均为50μL。 2.3 样品前处理测试样品需在室温20±0.5℃平衡后取样，啤酒和发酵液样品纸滤后再膜滤，取入样品瓶后直接进样；麦汁杀菌后离心取上清液依浓度而稀释，先纸滤后再膜滤，取入样品瓶直接进样。 2.4 定性定量方法 (1) 可发酵糖以保留时间(Rt)和标样添加定性，外标法和内标法定量。 (2) 有机酸以保留时间、标样添加和各有机酸紫外吸收光谱来定性，外标法定量。 3、结果与讨论 3.1 可发酵糖测定方法 (1) 方法的线性关系和最小检测限配制一定浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖，进样体积1μL～100μL，进样量C微克(μg)与峰面积(A）之间建立回归方程：以上各种糖的线性范围、回归方程及相关系数r分别为：果糖5～100μg，C=0.6631+7.642×10－6A，r=0.9999；葡萄糖50～100μg，C=2.8024＋6.601×10－5A，r=0.9992；蔗糖5～50μg，C＝0．1274＋8．173×10－6A，r=0.9995；麦芽糖32～320μg，C＝4．4336＋8.402×10－6A，r=0.9997；麦芽三糖6～120μg，C=2.3689+8.763×10－6A，r=0.9993，最低检出限量分别为0.2685μg、0.1844μg、0.2261μg、0.3585μg、0.427μg。 (2) 方法的精密度(内标计算)以木糖为内标，配制一定浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖混合标样，采用单点平均校正因子，同一样品重复进样6次，计算平标准偏差和相对标准偏差，结果为：标准偏差＜0.03；相对标准偏差＜0.4％。 (3) 方法的回收率对已知含量的样品添加一定量的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽三糖，计算回收率，结果为：97.2%～99．9％。 (4) 分析样品时内标法与外标法测定结果的比较同一样品内标法和外标法测定结果的比较，说明测定三糖以内的糖类，二种定量方法均可采用。 (5) 结论采用HypersilNH2柱，以重蒸水和乙腈作流动相，以保留时间和标样添加法定性，外标法和内标法定量，测定麦汁、发酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及麦芽三糖，此法已用于实际样品的测定。 3.2 有机酸的测定方法 (1) 定性方法啤酒中各有机酸保留时间的相对标准偏差＜1.4%；加入纯标样于啤酒中；对照峰高，如试样某一组分的峰高增加，表示试样中可能含有所加入的组分；啤酒中各有机酸紫外吸收光谱：草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸和延胡索酸在210～215nm处均有吸收，草酸、丙酮酸和延胡索酸在254nm处亦有吸收，其它有机酸254nm处无吸收。 (2) 定量方法的精密度和回收率取有机酸混合标样，采用单点平均校正因子，混合有机酸标样重复进样5次，采用平均校正因子，定量测定啤酒和加标啤酒样品，取5次测定值(g/100L)，计算相对标准偏差及回收率，结果为：各有机酸的相对标准偏差＜2.3%，回收率89.4%～107．8％。可见采用NucleosilC18柱，二极管阵列检测器，以磷酸二氢钾为流动相，等速洗脱，以保留时间和标样添加及各有机酸的紫外吸收光谱定性，采用平均校正因子外标法定量，此方法适于分析啤酒、发酵液和麦汁中的草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸等有机酸。

高效液相色谱仪结构原理是怎样的??
答：1.高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。...

高效液相色谱法的原理是什么?
答：高效液相色谱法的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。高效液相色谱法有“四高一广”的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速...

HPLC原理及基本操作是什么?
答：高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，可将液体混合物中的成分分离、成分定性及定量分析。适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。例如：可检测分析食品中的三聚氰胺的含量。

高效液相色谱原理是什么?
答：以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。构造可分为高压输液泵，色谱柱，进样器，检测器以及数据获取与处理系统等部分。与气相色谱法相比，液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要求把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物，...

高效液相色谱原理
答：一、原理：高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论，色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成，造成的结果就是色谱柱的柱效远远高于原始的经典液相色谐，它柱子使用后还能具有高度灵敏度检测器。能够对流出来的分析物进行连续检测。色谱仪是利用混合物各组分在固定相和流动相...

高效液相是什么原理?
答：高效液相的原理：液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相...

高效液相色谱的原理及分析方法?
答：原理主要有这几种:液—液分配色谱法 (Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分配。达到平衡时,服从于高效液相色...

高效液相色谱法原理 高效液相色谱法有何特点
答：1、高效液相色谱法的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。2、高效液相色谱法有“四高一广”的特点：（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大...

高效液相色谱的基本原理
答：高效液相色谱的基本原理如下：一、分离原理 高效液相色谱法主要利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配平衡进行分离。在分离过程中，流动相携带样品通过固定相，不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此会有不同的保留时间。二、检测原理 高效液相色谱法的检测原理主要是基于色谱柱流出组分...

液相色谱工作原理
答：液相色谱仪常见故障处理 1、气泡溢出 流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器...