液高效图谱如何分析?如,前沿峰、拖尾峰该如何判断及产生的原因解决方法等。

作者&投稿:旗垂 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
如何消除前沿峰?(就是高效液相色谱指纹图谱中的前沿峰)~

你检测的是什么物质?可以考虑以下的情况:样品的溶剂不适合。溶剂的洗脱力比流动相大。这时可以考虑更换样品溶剂或流动相,种类和比例要自己摸索了。也可能是柱超载,未被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。又或者是前沿峰的前半部分包含了小峰未被分开,形成前沿峰,这就要考察你的色谱条件了。

1.进样量过大,超过column的分离能力;或者进样体积太大
2.column不适合该体系,选用其它column;或者column老化,踏板数降低

高效液相色谱注意事项及解决方法

1、 操作过程若发现压力很小,则可能管件连接有漏,注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色),一般为漏液,其中一个感应器中已有溶剂,漏液故障排除后,擦干,点击On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、 连接柱子与管线时,应注意拧紧螺丝的力度,过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液,可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异,最好不要混用,必要时可使用PEEK管及活动接头;

3、 操作过程若发现压力非常高,则可能管路已堵,应先卸下色谱柱,然后用分段排除法检查,确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞,可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗,还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡),若还是无法通畅,则需换柱;

4、 运行过程中自动停泵,可能为压力超过上限或流动相用完;

5、 样品瓶中样品较少,自动进样器进样针无法到达液面,可采用调低进样针进样高度的办法,注意设置时不要使进样针碰到瓶底,微量样品分析应使用微量样品瓶;

6、 自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时,需重新定位。

7、 泵压不稳或流量不准,可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题,需更换;

8、 基线产生不规则噪声,可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡,若用离子对试剂,在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积,色谱柱才能达到足够的平衡),流动相被污染(更换流动相,清洗储液器、过滤器,冲洗并重新平衡系统),色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱),检测器不稳定;

9、 短期有规则的噪声,可能原因为泵压不稳或泵脉冲,调节溶剂不适当(如两种溶剂的互溶性问题),泵入口管路松或堵塞,泵太脏,泵柱塞磨损,检测器不稳定;

10、 长期有规则噪声,可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当;

11、 基线漂移,可能原因为系统不稳或没有达到化学平衡,室温不稳(未使用柱温箱),流动相污染或分解,柱污染,检测池泄漏,系统泄漏,固定相流失(另选流动相,另选色谱柱),测定的波长选择错误(对溶剂有吸收),样品组分保留太长(用强度合适的溶剂清洗色谱柱),检测器不稳定;

12、 每次进样时的保留时间不重复,可能原因为系统不稳或未达到化学平衡,由于气泡、各部件磨损等原因引起的泵压或泵脉冲输液不稳定,进样体积太大或样品浓度太高平衡被破坏,溶剂配比不合适,柱被污染;

13、 无峰,可能原因为检测器选择错误,使用错误的流动相,样品降解;

14、 色谱峰比预计的小,可能原因为进样体积错误,检测器灯故障,进样问题(瓶号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞);

15、 峰变宽,可能原因为进样体积太大或样品浓度太高,过滤器、保护柱入口、柱入口或连接管路有部分堵塞,检测器时间常数设置错误,进样器问题(如阀漏、针头堵塞或损坏),柱或保护柱被污染,对流动相来说样品溶剂太强,使用错误的色谱柱,温度变化;

16、 出现双峰/肩峰,可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞,柱或保护柱被污染,柱性能下降,保护柱失效,进样体积太大或样品浓度太高(样品过载),平衡破坏;

17、 前沿峰,可能原因为进样体积太大或样品浓度太高(样品过载),平衡破坏,对于流动相来说样品溶剂非极性太强(对于反相柱),柱或保护柱被污染,柱性能下降,保护柱失效;

18、 脱尾峰,可能原因为柱或保护柱被污染,柱性能下降,保护柱失效,进样器问题(如阀漏等),检测器时间常数设置错误;

19、 出现鬼峰,可能原因为流动相被污染,样品预处理时产生降解或混入杂质,先前进样的流出物,样品定量管清洗不当,注射器脏,柱被污染,进样装置被污染,流动相中含有稳定剂/稳定剂变化。

怎样才能得到层析斑点集中、溶剂前沿整齐一致的图谱?
答:需要对待测物样品进行样品处理,将样品中的干扰物质去除,以提高分离的纯度和减少斑点的扩散。2、其次色谱条件的优化:层析法的分离效果受色谱条件的影响,如流速、移液量、流量、相对湿度、温度等都会影响分离效果。3、最后使用高质量的层析试剂:使用优秀的层析试剂即可以帮助得到更好的图谱。

...反应生成新物质?如果单独分析则流动相不同,那么混合后分析怎么...
答:两种化合物加上产物一共是三种物质,再加上有可能的副反应,体系中可以有大于等于三种物质。1、所以造价分别进两种反就前的原料,分别确定其出峰时间。2、将两种原料反应过程中的反应液取样分析,如果有三个或三个以上峰,说明有新的物质生成。然后每隔一定时间进样分析,根据生成峰的大小变化。就可以...

高效液相色谱仪标准曲线怎么做
答:2.0mg/ml的样品,然后按照浓度由低到高的顺序进样分析。(由低到高是避免系统误差)注意:这里是配制一份样品,稀释成若干线性用的样品。一般至少5个浓度。然后可以在excel上形成散点图。然后添加趋势线,并且显示R2和公式。这个y=97.04x+0.0498就是这个线性公式,R2是相关系数,如下图所示:...

液相色谱原理
答:液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪,具有常规HPLC的基本性能,并扩展了更多智能化的功能,能很好的满足用户的各类不同的应用要求,使用户能更加轻松的使用,并获得准确的分析数据。一、原理:高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论,色谱柱则是用特殊的方式用小...

在高效液相色谱仪离线工作站中,明明是拖尾峰,为什么拖尾因子显示是前沿...
答:你放大看一下,还有打开手动积分。应该在你所需要的峰前面还有一个小峰,默认积分方法不把该小峰算做一个峰,而是把该小峰和你需要的峰一起积分了。

高效液相是什么原理?
答:高效液相的原理:液相色谱是一类分离与分析技术,其特点是以液体作为流动相,固定相可以有多种形式,如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中.为了区分各种方法,根据固定相的形式产生了各自的命名,如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。液相色谱是一类分离与分析技术,其特点是以液体作为流动相,固定...

高效液相色谱有几种定量方法?其中那种是比较精确的定量方法?并简述?
答:注意:内标法比较适用于低含量组分的分析, 一般选作内标物的物质,最好在样品中不存在,其保留值在所有组分保留值的中间,加入内标物的含量和待测组分含量不应相差很大。4.叠加法(内加法)内加法适用于较特殊的情况:图谱上没有适当位置可插入内标峰,或因各种条件限制无合适的内标物时。此时可先...

高效液相色谱与经典液相色谱有何异同?
答:1、高效液相色谱法如下:①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。②高速:分析速度快、载液流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。③高效:分离效能高。可选择...

高效液相色谱法( HPLC)的流动相如何选择?
答:高效液相色谱仪(HPLC)中流动相的选择涉及到多种因素,甲醇与水80:20的比例是一种常见的流动相组成,被广泛用于很多分析方法。这种比例的选择主要基于以下几个原因:溶解性能和极性调节:溶解性能:甲醇和水的混合物具有较好的溶解性,能够溶解多种化合物,尤其对于不同极性的化合物有良好的溶解性,使其...

请问高效液相和质谱联用的特点,如何提高高效液相的分析度。
答:质谱能够提供物质的结构信息,用样量也非常少,但其分析的样品需要进行纯化,具有一定的纯度之后才可以直接进行分析。因此,人们期望将色谱与质谱联接起来使用以弥补这两种仪器各自的缺点。如何提高了分离度:用更柱效更高的色谱柱,或增加柱长,减小内径,减小粒度,使用梯度,改变流动相 ...