ROUND((C9/21*S9*2),2)
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计算机ROUND(G9*H9*C9,2)是什意思~
(C9/21*S9*2) 这个代表一个计算的公式出来的数值，2代表保留两位小数，意思就是算出来的数值保留两位小数。这样方便统计。
RNA提取的一般步骤总结
RNA提取的一般步骤总结
。 ^ 2 ^。 G＃N1 E; WRNA萃取原理：
/ |＃K0 K. @ 9 W |破碎细胞或组织，RNA在氯仿等有机溶剂萃取后，并再经过沉淀，洗涤，干燥，最后溶解变性剂。然而，由于RNA酶无处不在，随时可能会RNA降解，所以有很多的地方需要注意在实验中，稍有疏忽就会前功尽弃。
0 T3 Z（F＆_，D6 C％^“Y A6 _RNA H6提取的一般步骤
- O：Y + X $ P＃S8 U4 M9所有RNA的提取过程有五个关键点，即：有效破碎细胞或组织样本，有效地使核蛋白复合物变性内源性RNA酶的有效抑制;有效RNA提取的DNA和蛋白质的混合??物;参与有效地去除多糖杂质多糖含量高的样品。但最关键的是，抑制RNA的活动。 RNA提取阶段可以以两种方式使用：提取总RNA的核酸，然后沉淀出氯化锂;直接在酸性条件下，而在酸性条件下，DNA和蛋白质提取的RNA留在水相到有机相中。的第一提取方法将导致分子量小RNA的损失，这种方法的使用的电流的频率，已经非常低。 （O（克; ^ + K）F + I＆]％P
实验步骤：
* L＆D6 S5 E（Q1 F（G2 | J ^ 0坏了组织的RNA→沉淀→分离RNA→洗涤→保存RNA→解冻RNA的RNA。6 D8} Q，Y，和g * X
甲破碎组织和RNA酶的失活，可以同时进行，也可以使用，盐酸胍，异硫氰酸胍，NP-40，SDS，蛋白酶K等粉碎组织，加入β-ME抑制RNA活性。
“S（％）F，`0 [1 D *米！] 0 e2时，RNA的分离一般用苯酚，氯仿等有机溶剂中，通过加入少量的异戊醇，并在此步骤之后，离心分离，RNA一般分布在上层中，蛋白质层分离。
＆X. P）I）Y，U / L＃[3，一般用乙醇，3M醋酸钠（pH值5.2）或异丙醇沉淀RNA。 2 @ 0 D＆Z7？ + I，G1 @
4，用70％乙醇洗涤，洗涤的RNA，有时，为了避免RNA被洗掉，此步骤可以省略，可以是洗涤干燥或干燥的乙醇，但不能太干，否则难以溶解后。
3 @％V“O9 V + I1 J2 O9 K”Z5，融化的RNA通常用于TE。
; L5 F。 N6}（S1吨％Z＆J6中，保存的RNA应低温为了防止痕量RNase的污染，分离出的RNA从富RNase的样品（如胰脏，肝脏）的需要要被存储在甲醛长期存储高品质的RNA存储，特别是从大鼠肝脏RNA，水存储在一个星期从大鼠脾脏中提取的基本降解的RNA提取，仍然存储在水为3年，稳定，此外，长度为比小的跟踪的RNase降解大于4KB誊转录呈现更敏感的，以增加RNA样品的存储的稳定性，将RNA溶解在去离子甲酰胺中，并存储在-70℃下保存的RNA甲酰胺必须不包含来自胰腺RNA可以在碎片的RNA降解甲酰胺一年至少可节省你可以使用下面的方法，当准备使用RNA：加入醋酸钠，0.3 M，12000×g离心5分钟沉淀RNA。
P3 [7米* ^ $ U $ _“？
：F“徐* N（？（I氯化锂中提取总RNA的方法：
“U;}'I！R'^'^＆升尿素变性的蛋白有高浓度的本发明的方法，并抑制RNA酶，RNA是有选择性的用氯化锂沉淀，是特别适合于少量组织RNA提取从大量的样品，具有快速简洁的长处，但也有少量污染的DNA和RNA产量不高，损失小RNA片段的缺陷。＃?* S：} 9`* R4 Z3 P
检测试剂：
“D $ R6 Q？_ I8 Q1，氯化锂/尿素溶液氯化锂126克的（3M）的尿素，360克（6M）加水至1L，通过过滤灭菌]
7 _8 W1吨“O9'Q！I4 Z2的悬浮液[10mM的？的Tris-HCl（pH值7.6），1mM的EDTA（pH为8 0），0.5％SDS]
！ M8第4季R＆Y：B＃`7天的测试过程：7 [？ $`*}; O7 _ Z'{
1，进行了大量的组织或细胞，每克组织或细胞加入5-10ml的氯化锂 - 尿素溶液，匀浆器件速度匀浆2分钟，对于小数量的细胞（107细胞/毫升）每克组织或细胞中加入0.5毫升氯化锂， - 尿素溶液手动匀浆，并转移到Eppendof管。 ＆Y）B：E，Q“L / ^ Q：\ $小号
如图2所示，将匀浆液放置在0-4℃4小时后，12000克离心30分钟。 X-，C6 D-N / N0 K表！ T2 A
3，颗粒，加入1/2的体积原始匀浆液体氯化锂 - 尿素溶液，重复步骤2。
）YX）S0 K9 Y6 J，e4的，用1/2体积的原来的匀浆液氯化锂 - 尿素溶液重构沉淀后，加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇在室温下15-30分钟，而不是当摇组合，4000克的离心5分钟。
3 D2 V“I1??（?* D5，和水的上清液中，添加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）和2倍体积的乙醇??，-20℃下进行1小时，5000克离心。
？L4“Q4 U L：* K％Z $？ （E6，70％的乙醇沉淀，洗涤一次，并在真空中干燥3}; R0 [/ Q'G9 Q
是RNA，RNA溶解液溶解沉淀物，分装，保存于-70℃。
0 F。 X％R（H％B7?的
！ Y7 J5 U $ C'|）[％?！ J3e：Q蛋白酶 - 热酚法|“^ 0 B *）P3 S * C4 B4 H4升
本发明的方法是适合的病毒RNA的提取
* I（I + B＃R！K测试试剂：
$？ 4 [7 H9`）的蛋白酶K（终浓度为50ug/ml），J1，J5 P L6 V / T7 [/ I
2，2×缓冲液：1％SDS的？的20mM Tris-HCl（pH值7.6）中？ 0.2MnaCL9 H，P] Y + \ $ Z）O
测试程序：＃W3 [$] 5 Y V8 G1
1，纯化病毒溶液中加入等体积的缓冲液，蛋白酶K，在37℃下40-50分钟。
- K0 - P / E'Q-Z7?G0 M＃{＃D2，加入等体积的65°?预热的酚溶液，轻徭薄赋，光5分钟，然后在65℃徭培养。
？W！ `; W（E：酷睿i3 ^ 3，离心，取上清液，氯仿萃取时间。（Z0 D; J2 7米+ D2 Q＆X?
4，取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）和2倍体积的乙醇??，-20℃下进行1小时的离心分离，5000克（万克，10分钟）。
7 [/瓦特，氢气D6 U $ k5的，70％乙醇洗涤沉淀物一次。在真空下干燥。
％A5 Y; {（W％3 * Y O E）P6 RNA溶解液溶解沉淀RNA，分装，保存于-70℃。对策植物RNA提取过程中难以
对策植物RNA提取过程中难以
）O5 B7 D / Q3 _酚类化合物的干扰及对策：
？A9 D * Z3 K？ 7 W许多植物组织中，特别是水果（如苹果，樱桃，李子，葡萄等）的植物和树木，植物，含有丰富的酚类化合物。酚与植物生长和增加的含量。因此更容易从一个年轻的植物材料的RNA提取。此外，针叶树植物在落叶植物的叶子中的织针的多酚含量要高得多。氧化后匀浆焦黄的加深，在植物材料匀浆的酚类物质将被释放，和氧化的程度的增加，这种现象被称为褐变的影响（BROWNING效果）。酚类化合物（例如，醌类）与RNA稳定地结合，可被氧化，从而影响的RNA的分离和纯化。纽伯里与酚类的总量中的材料没有发现RNA提取的难易程度之间的相关性，因此，并非所有的酚类化合物的影响RNA提取。但一般认为，所谓的“缩合单宁”聚合物多羟基黄酮醇类物质（如原花青素物质）是影响RNA提取的一类化合物。除去酚类化合物的一般方法是在初始阶段的提取，以防止它被氧化，然后分离和RNA。 9 B0 S！} 0 U6 | 9 K / L！ V“V G1?/ @
防止被氧化的酚化合物的方法：
的“V y的，A4 K7 N /还原法Z1：一般，在提取缓冲液中加入（ - 巯基乙醇，二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸？防止酚类的氧化，有时中提取溶液（ - 巯基乙醇的浓度可以最高为2％（ - 巯基乙醇，等也可以被中断以便苏由多酚氧化酶的失活的二硫化物，即添加到沉淀RNA过夜（ - 巯基乙醇（终浓度为1％），可以防止氧化的在这个过程中的硼氢化钠（硼氢化钠）的酚类化合物是可还原的醌的还原剂，用提取缓冲液，因为它处理棕色的消减，醌化合物可被还原成的多酚化合物。
＆H Z。 P +?＆T％T5 G＆G1 M-P / Q！ U2，螯合剂的方法：螯合剂的是聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）和聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP），CO-N =基团包括多酚化合物，强的结合能力的结合能力与多酚化合物的芳香环的数目增加羟基加强。原花青素物质包含许多在芳香环上的羟基基团，其中可形成稳定的复合物与PVP或不溶性PVPP，使得原花青素的物质不能为多酚氧化酶的酶底物被氧化，并且可以提取步骤后，除去。随着PVP去除多酚时pH值是一个重要的影响因素，结合多酚PVP pH值8.0，更迅速地降低[11]。当原花青素是单独使用时的更大的质量PVPP无法以除去所有的这样的化合物，因此需要与其他方法结合使用。
？p％的N0瓦特/ t7的r3中，Tris-硼酸盐的方法：如果提取缓冲液含Tris-硼酸盐（pH7.5的），其特征在于，所述硼酸可以根据带*氢与酚类化合物形成复合物，从而抑制酚类氧化与RNA结合。这种方法是非常有效的，所以在提取缓冲液中的溶液中加入Lбpez-Gбmez不再是其他还原剂。的Tris-硼酸浓度过高（> 0.2M）将影响的RNA的回收率。
＃P8] 0 ^ 8 K3 a4中，牛血清白蛋白（BSA）（法国）：物质和BSA的原花色素可产生类似的可溶性或不溶性的复合物的形成之间的抗原 - 抗体相互作用，降低了材料和RNA的结合的原花色素的机会，从而提高了产率的RNA。 BSA和PVPP合并提取液效果会更好。由于RNA酶往往含有BSA的要加入在使用肝素抑制核糖核酸酶的活性。 ?＃H / Y（P7 Q）J4）G * W1 G8升
5星，的丙酮：Schneiderbauer冻结的云杉，松树，山毛榉等，从-70℃的丙酮萃取植物材料与抛光后，可以有效地分离成高品质的植物材料的酚醛化合物的丰富的RNA。 @ +？ - X / V9 Z8 T8 H：B3?！白c
去除酚类化合物：
＆Z＃H）G0 H＆$ I1 N F L9 N的李+和Ca2 +沉淀RNA的方法可以将未氧化的酚类化合物清除和PVP，不溶性PVPP或BSA结合的多酚类物质可以直接通过离心分离除去，或曼宁，使用高浓度的2 - 丁氧基乙醇（50％）中，以沉淀RNA除去苯酚和氯仿萃取。多酚，溶解在2 - 丁氧基乙醇除去，然后含有50％的2 - 丁氧基乙醇的缓冲液洗涤RNA沉淀他认为甚至多酚被氧化，其氧化产物仍然可以被溶解在高浓度的2 - 丁氧基乙醇溶液中以除去残留的多酚删除此外，没有必要再使用硼氢化钠处理。 C6 Y8 A1 SV：？2
多糖的干扰及对策：6 I-B3 R4?$ T＆O
？多糖的污染是提取植物RNA经常遇到的另一个棘手的问题。植物组织往往是富含多糖，许多的物理化学性质和RNA的多糖是非常相似的，它是难以将它们分开。去除多糖而RNA是还裹着可移植性路程，导致RNA产量减少; RNA沉淀，也产生多糖的凝胶状沉淀物，例如含有多糖类的RNA沉淀不溶于水的，或溶解生成的粘稠溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，从而污染的多糖的RNA样品不能用于进一步的分子生物学研究。在传统方法中，通过SDS-盐酸胍处理可以部分地去除一些多糖;氯仿萃取可以移除一些多糖由苯酚的存在下，高浓度的Na +或K +离子的条件下;?? LiCl沉淀的RNA也可以是多糖的一部分留在上清液中。然而，即使通过这些步骤仍会发现有相当数量的多糖和RNA混合在一起，所以需要使用更有效的方式来解决污染问题的植物RNA分离和纯化的多糖。
7 ['X / E，d8上×（沸点（| 9 C＆n与低浓度的乙醇，以沉淀除去多糖多糖是一种更好的方法提取RNA或溶液缓慢地加入到无水乙醇至终浓度10％至30％，并且可以使沉淀的多糖，而RNA保持在溶液和乙醇的溶液中加入，通常是在植物材料匀浆Lewinsohn RNA萃取从裸子植物的木质茎，在一个统一的在乙醇中的浆料的上清液加入到最终浓度为10％的情况，以沉淀多糖，但Tesniere，从葡萄浆果组织中提取RNA，通过CsCl超离心，和乙醇沉淀后的RNA溶液中加入最终浓度为30％的乙醇的沉淀多糖，和进一步纯化的RNA样品。
！ I5 B5米* Z9八国集团M4? - N / D另一个常用的方法是醋酸钾沉淀多糖的方法。加入1/3量的5 M醋酸钾（pH4.8）解决方案巴赫卢勒云杉组织匀浆中提取的RNA沉淀多糖;安斯沃思在鲁梅克斯植物花卉组织RNA提取时加入1/5体积的5 M钾乙酸乙酯（pH4.8）溶液。 Hughes等人在棉叶和花粉RNA的提取被添加到1/3体积的8.5M醋酸钾（pH值6.5）溶液匀浆为了除去多糖等杂质。的植物材料的RNA提取物中，上述两种方法组合使用。的这种Lбpez-GбmezRNA提取芒果中果皮时，将匀浆液中加入0.25体积的无水乙醇和0.11倍体积的5M的醋酸钾溶液以除去多糖杂质。 Su等人在除去多糖藻酸盐，单独使用乙醇或醋酸钾是无效的，并只使用最好的结果的组合。
6 C9 | 5 Q1 B9 ??[5 L1 S + N方这样的缓冲液中含有高浓度的NaCl有助于去除多糖。 Chang等人在提取松树核糖核酸，NaCl浓度为2.0M和1.0M的缓冲溶液中，和氯仿萃取和乙醇沉淀RNA与多糖的分离的RNA。曼宁是萝卜种子和其他材料，苯酚提取，上清液稀释的Na +离子的浓度调节至80毫米，然后加入0.4体积的2 - 丁氧基乙醇沉淀去除多糖。 3 B1 H＃M'{+ {0 U％U，K2 @，V
蛋白质杂质的影响和对策：$ _at_ - G5 O（F1 S9 _2 V * G2 N / ^
？蛋白RNA样品的污染是一个重要因素。核糖核酸酶和多酚氧化酶是蛋白质，从而获得完整的，高质量的RNA必须有效地去除蛋白杂质。传统的方法是，以抑制在冷冻条件下活性的RNase等磨碎的植物材料;提取缓冲液中含有的蛋白质变性剂，如苯酚，胍，十二烷基硫酸钠，十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），这样可以使在匀浆蛋白质的变性，聚集，一些蛋白酶K降解蛋白质杂质。五月进一步除去蛋白质，用苯酚和氯仿萃取。 T7五（F1 J9 @ + E
？Wilcockson不同的溶解度，他们可以使用高氯酸钠溶液中的蛋白质和RNA分离。 70％高氯酸钠溶液，大于该蛋白质的溶解度的RNA的溶解度，从而大多数的蛋白质沉淀。随后通过离心分离的上清液中加入两倍体积的无水乙醇中，然后将RNA可以安顿下来，并可以溶解在70％的高氯酸钠溶液，残余蛋白保持在上清液中。这可以除去大部分的蛋白质。
3 QE / \ * I“A＆@次生代谢产物的影响及对策:: N3）N F K＃N，P F6 H0 J2 A0 {
？另一个困难是从植物组织许多高等植物组织，尤其是成熟组织可以产生一些水溶性的次级代谢产物中提取的RNA的质量，这些次级代谢产物很容易与RNA结合和RNA提取，满分阻碍分离的生物活性的RNA。这些次级产品不能确定什么具体的物质，但也没有特别的方式来解决这个问题。贝克休斯等选择性沉淀Chirgwin氯化铯梯度离心分离和纯化的松树种子，成熟松树针叶植物组织RNA中艾弗森的RNA恢复。 （M S5 O％F！H-Q * \（“`（}
？难易其他生物材料的植物组织中，特别是高等植物细胞内外的复杂多样性的组合物，使植物组织RNA提取阶段。通常，在实践中发现，即使同一种植物的不同组织RNA提取方法不同，不同的植物材料包含某种干扰因素有很多，不同的RNA提取方法可能适用，即使是同一种植物的相同的组织材料，但是从不同的基因型的植物，RNA提取的方法可能不相同。因此，对于一个工厂或组织，其相应的RNA提取方法必须经过的探索和实践，以建立。 ＃S0一个＃G7 L3 S＆A
？随着植物分子生物学研究领域的扩大，我们可以肯定地说，出现了新的困难，但也RNA提取植物材料的过程中，作为其研究的基础上，不断探索和经验积累，科学家们将很快解决这些困难，并为植物分子生物学的发展铺平了道路。一些特殊的植物RNA提取方法
一些特殊的植物RNA提取方法
$ E * [U（E％H'多酚植物RNA提取：J！D，2 V（R! B＆?
？？苹果棉花多酚植物RNA提取采用TRIZOL一般没有来。验证此方法是有效的，所提取的RNA的纯度没有特别高的，但作为北方足够。 6 J＆D2 U（\ 6 W8 _＆O4 E1 X1吨
试剂：
＃S7 S8?！ R＃W1 Y＃克提取缓冲区200毫升的：氯化钠1.1688克100毫米的Tris2.4228克10毫米（的Tris-HCl，4.0）EDTA的5.8450克10mM的SDS2.0000克1％NaOH溶液调节至8.0，并设置到200毫升，再加200ulDEPC解冻。 * J）; T2 @）T4 W'F
测试步骤：
！ ?A0 I * C（W5 S * A'的W11.5毫升管的冷冻液态N2的吼加入0.1克样品，加入500UL苯酚 - 氯仿，然后加入500UL提取缓冲液，剧烈振摇1分钟，放置在冰上5分钟。 “F3 S0 V5 @ 0 S7 I1?的
2，4 12000rpm进离心15min后，将上清液转移到新的试管中，添加氯仿异戊醇提取时间。 ）H'L7 D＃D“Y8 @
3，取600ul异丙醇-20℃沉淀20分钟。
＆W：M2 R：I4 \ L＃J4，12000转离心10min。
！ IY \ 8 b7的A5中，将沉淀物用乙醇（70度）。
？K！ T. D1 [0 w +？）_0 D5？ 6，8000RPM 5分钟。
“A，Y＃}'F（`5} 6我+ N！X7，沉淀干燥，，溶解30ulDEPC水。^ 0 QR +`5 J（N'['M9中号
＃M / R3 O2?！ T6 Z $`1 M＆E。 ^
银杏等木本裸子植物的RNA提取方法：A I＆V！ H0`？ ?
？银杏，香和其他木本裸子植物，次生代谢物和多糖，分离和纯化的RNA干扰RNA提取的质量和产量，严重影响了酚含量，分子生物学实验的开展带来阻碍。目前，RNA提取方法的许多传统的Trizol试剂盒，SDS和其他方法提取银杏RNA，蜀郡张等人（1993年），CTAB法提取RNA的质量也较差，的退化也是非常严重。改善其的提取步骤，以获得更高质量的银杏RNA样品。 / S4我* V K8 S）x
检测试剂：M（Q＃E7 N3吨;`＃I M（[
1，1M三：12.11克?里斯被溶解在60米L水，用浓盐酸PH8 0.0，体积LOO毫升无菌DEPC水溶解使用。
？`4 C9 {）P2 \ 4 T2 M EDTA，500米：18.61克?DTA“H 2O80米升的水，搅拌至溶解，用NaOH pH值调至8.0，定容至100ml。; V＃X G4 M＃Q3 C5 P * J！H4 Y！
3，10摩尔/ LLiCL的了：42.4 gLiCL 100毫升水溶解即可。 9 I）@一'\＆W + C P * G
如图4所示，提取缓冲液（DEPC处理）：2％CTAB（蛋白质变性剂）0.2％PVPK 30（除去的多酚）100米摩尔Tris-HCL（pH8.0）中25米M EDTA（金属螯合剂混合物）2.0M的氯化钠（去除多糖和CTAB）与方法：10 mL的1 mol / L的三，PVP2克，2克CTAB，5ML 500毫米EDTA，11.7gNaCL，将音量设置为100毫升。 ）O + \ 5 E！ X，O＃A（M + P8 H * K9 N0 q
5，亚精胺（提取液中加少量）（RNA酶抑制剂）
＃J9 G6 O / H（U'D6，4％的的稀疏乙醇（添加）提取（去除多酚）'D E，D（J. K $ Z！O9 f
7，氯仿和异戊醇（24：1）（萃蛋白质））U）A +] 4 \＃Q
8，10 MLiCL（沉淀物大分子RNA）
7 M +）G4 J4 m5的C0的f-\ 9，SSTE（溶解RNA）的1.0M的氯化钠0为1m10米MTrisHCL（pH为8）法：氯化钠2.9克，0.25毫摩尔EDTA（pH8.0）中，5％SDS克SDS，0.5毫升1个三L 500毫米，100 U EDTA，pH值8.0，定容至50 mL。 。 M5 Z + J3 X0 V＆\ 6 E7?＃R
测试准备：_5 Z9}“F％Q6吨
的灰浆和玻璃器皿包裹在铝箔烘焙温度为200℃或以上的至少2小时，或180 * C高温烘烤4小时信息。 X7 N3 W，W2} 9 M
2，塑料制品（提示和管）最好的新的和裹在报纸，121'C高压灭菌器，消毒40分钟，或两次121'C高压釜每次灭菌20分钟，然后烤箱烤千。
X * F +?，V7}。 A3，所有的溶液的制备，加DEPC水DEPC UJ的浓度为0.1％，在37℃培养过夜，1211C高压蒸汽灭菌40分钟。液（Tris，因为它是没有用DEPC，所以的Tris DEPC-处理的水溶液中制备后灭菌处理，。）
）X＆B {％E ^？＆F：S0 q检验程序：“Y6 U +`C * \ X2一个＃R
[据文献（蜀郡张，1993）CTAB法，小的改进。 】
F ^ + E9 I＃H / Q7 M * A *] 1，4毫升提取物加入到lOmL离心分离机的加热管C卜650C水域。 $ D +？ 4 W7 \ 3 J：W，M
2，在研钵中，用液氮冷却，在研钵中的抗氧化剂的PVP加入少量，采取1克低温冰箱银杏，迅速放置在研钵中，不时加入液氮在研磨过程中，为了防止叶片熔体充分研磨紧接添加到预热的提取缓冲液中，并混合与手的功能。 C4我+ L / Z * C5?）V
3，65℃，1分钟，冷却至室温的水。
（N2 _at_）U：S，{9 M“E8 F4中，通过添加量（4毫升）的氯仿：异戊X17（2 = L：1）混合，10,000 rpm下，40C，10分钟。
（H6 P O1 Y8 P＃？5星，仔细的上清液中，加入等体积（4毫升）仿：异戊醇（24：1），并混合，10,000 rpm下，40C，离心10分钟。{＃K / Z5? ：X：V1 x
6，取上清液，加入1/4体积IOMLiCL，混合，4℃沉淀过夜，然后10000RPM离心20分钟。
7×P4 O6 Z1 D！ [8} 7，干燥，溶解沉淀500U?SSTE 1.5M大号离心管中放了一炮。等体积的氯仿：异戊醇混合，1万转，40C，离心10分钟。
，H2 b7的C1e* [6 R4的c8的离心拉伸上清液，加两倍体积的无水乙醇，-70℃沉淀至少30分钟，或20℃的沉淀物2小时。 “W * C'Y1 P-T5 K表）^`
9，12000rpm进，40C，离心20分钟，用70％乙醇洗涤两次，干燥沉淀去。 1×，S * X0 V“Y6 F /升
10，40 U LDEPC处理水以溶解沉淀物，得到的RNA样品。 8 F2 C-S4 R3 O9 R4 T E＆{
11，除了电泳，紫外检测，RNA-70℃冰箱备用。
？Q0 O7 V.] 9 x，{1我：__
！ U * X1 M5 G9一个（W％U改进克拉普提取：
1 R）R＃S3?。 Q1诉W测试试剂：
C7 Z1 ^）J5 A＆F＆W（K D1，RNA提取掖：母液：4mol异硫氰酸胍的20毫摩尔EDTA 20毫摩尔MES pH值7.0。工作液：取400毫升母液加入1.7毫升2-ME贮存在4 ℃，储备/ I $ E. RS％Z
2，RNA重新悬浮液：氯化锂10毫摩尔乙酸钠的2mol调整最终体积为250ml，pH为5.2，灭菌后，存储在4℃的条件下的使用。 2 U J1 S9 V8一个。 ?
测试步骤：
）O / O型，L＃q构成-D8 V）U1，取新鲜植物材料0.5?1g和冻干。如果有必要，可以添加至0.2g砂磨一起，拌匀，然后加入10ml RNA提取掖。 7 N Q：B“S N9 B！J $ü
2，4℃，在8000RPM离心10min的条件下，上层水相转移到一个干净的离心管中，并加入等体积的苯酚/氯仿萃取除皱离心10分钟，在4℃的条件下，8000RPM。
1，N：K +] 3 R A7`3，将上清液转移到一个干净的离心管中，将上清液1（添加调匀10毫升氯仿洗涤，然后10ml氯仿中，在4℃的条件下，8000RPM离心10min 。）
$ P + Y，P / ^ - W / E“G”K0 Y：[4，小心地将上清液转移到另一个干净的试管，加入1/10体积3摩尔乙酸钠和2倍体积的冷乙醇，-80℃下降水两个小时的条件：T＆M8 C-W5一O1 O！
5，在4℃，8500rpm离心30分钟的条件下。小心弃去上清液，将沉淀再悬浮在的RNA再悬浮，并在4℃下放置1小时的条件下。 9 B7 Z＃K4 V（同期L8 Q0 A8?）I％|
6，4℃的条件下，8500rpm离心10min。丢弃上清液DEOC的沉淀物溶解在适当体积的处理过的水。测试后的包装，保存在-70℃的条件下。
四舍五入。。你这是EXCEL里的。G9，H9，C9，都是单元格引用，*号就是乘号了，四则运算。。那个2就是保留两位小数。
Round是对数字进行四舍五入的函数
Round(expression, numdecimalplaces)
举例：假设在excel表中A2=4.5256要取2位小数，则公式为round（A2，2）结果为4.53
取整不要小数的话即round（A2，0）结果为5
再如 A2=4.5211要取2位小数，则公式为round（A2，2）结果为4.52
取整不要小数的话即round（A2，0）结果为4
(C9/21*S9*2) 这个代表一个计算的公式出来的数值，2代表保留两位小数，意思就是算出来的数值保留两位小数。这样方便统计。
RNA提取的一般步骤总结
RNA提取的一般步骤总结
。 ^ 2 ^。 G＃N1 E; WRNA萃取原理：
/ |＃K0 K. @ 9 W |破碎细胞或组织，RNA在氯仿等有机溶剂萃取后，并再经过沉淀，洗涤，干燥，最后溶解变性剂。然而，由于RNA酶无处不在，随时可能会RNA降解，所以有很多的地方需要注意在实验中，稍有疏忽就会前功尽弃。
0 T3 Z（F＆_，D6 C％^“Y A6 _RNA H6提取的一般步骤
- O：Y + X $ P＃S8 U4 M9所有RNA的提取过程有五个关键点，即：有效破碎细胞或组织样本，有效地使核蛋白复合物变性内源性RNA酶的有效抑制;有效RNA提取的DNA和蛋白质的混合??物;参与有效地去除多糖杂质多糖含量高的样品。但最关键的是，抑制RNA的活动。 RNA提取阶段可以以两种方式使用：提取总RNA的核酸，然后沉淀出氯化锂;直接在酸性条件下，而在酸性条件下，DNA和蛋白质提取的RNA留在水相到有机相中。的第一提取方法将导致分子量小RNA的损失，这种方法的使用的电流的频率，已经非常低。 （O（克; ^ + K）F + I＆]％P
实验步骤：
* L＆D6 S5 E（Q1 F（G2 | J ^ 0坏了组织的RNA→沉淀→分离RNA→洗涤→保存RNA→解冻RNA的RNA。6 D8} Q，Y，和g * X
甲破碎组织和RNA酶的失活，可以同时进行，也可以使用，盐酸胍，异硫氰酸胍，NP-40，SDS，蛋白酶K等粉碎组织，加入β-ME抑制RNA活性。
“S（％）F，`0 [1 D *米！] 0 e2时，RNA的分离一般用苯酚，氯仿等有机溶剂中，通过加入少量的异戊醇，并在此步骤之后，离心分离，RNA一般分布在上层中，蛋白质层分离。
＆X. P）I）Y，U / L＃[3，一般用乙醇，3M醋酸钠（pH值5.2）或异丙醇沉淀RNA。 2 @ 0 D＆Z7？ + I，G1 @
4，用70％乙醇洗涤，洗涤的RNA，有时，为了避免RNA被洗掉，此步骤可以省略，可以是洗涤干燥或干燥的乙醇，但不能太干，否则难以溶解后。
3 @％V“O9 V + I1 J2 O9 K”Z5，融化的RNA通常用于TE。
; L5 F。 N6}（S1吨％Z＆J6中，保存的RNA应低温为了防止痕量RNase的污染，分离出的RNA从富RNase的样品（如胰脏，肝脏）的需要要被存储在甲醛长期存储高品质的RNA存储，特别是从大鼠肝脏RNA，水存储在一个星期从大鼠脾脏中提取的基本降解的RNA提取，仍然存储在水为3年，稳定，此外，长度为比小的跟踪的RNase降解大于4KB誊转录呈现更敏感的，以增加RNA样品的存储的稳定性，将RNA溶解在去离子甲酰胺中，并存储在-70℃下保存的RNA甲酰胺必须不包含来自胰腺RNA可以在碎片的RNA降解甲酰胺一年至少可节省你可以使用下面的方法，当准备使用RNA：加入醋酸钠，0.3 M，12000×g离心5分钟沉淀RNA。
P3 [7米* ^ $ U $ _“？
：F“徐* N（？（I氯化锂中提取总RNA的方法：
“U;}'I！R'^'^＆升尿素变性的蛋白有高浓度的本发明的方法，并抑制RNA酶，RNA是有选择性的用氯化锂沉淀，是特别适合于少量组织RNA提取从大量的样品，具有快速简洁的长处，但也有少量污染的DNA和RNA产量不高，损失小RNA片段的缺陷。＃?* S：} 9`* R4 Z3 P
检测试剂：
“D $ R6 Q？_ I8 Q1，氯化锂/尿素溶液氯化锂126克的（3M）的尿素，360克（6M）加水至1L，通过过滤灭菌]
7 _8 W1吨“O9'Q！I4 Z2的悬浮液[10mM的？的Tris-HCl（pH值7.6），1mM的EDTA（pH为8 0），0.5％SDS]
！ M8第4季R＆Y：B＃`7天的测试过程：7 [？ $`*}; O7 _ Z'{
1，进行了大量的组织或细胞，每克组织或细胞加入5-10ml的氯化锂 - 尿素溶液，匀浆器件速度匀浆2分钟，对于小数量的细胞（107细胞/毫升）每克组织或细胞中加入0.5毫升氯化锂， - 尿素溶液手动匀浆，并转移到Eppendof管。 ＆Y）B：E，Q“L / ^ Q：\ $小号
如图2所示，将匀浆液放置在0-4℃4小时后，12000克离心30分钟。 X-，C6 D-N / N0 K表！ T2 A
3，颗粒，加入1/2的体积原始匀浆液体氯化锂 - 尿素溶液，重复步骤2。
）YX）S0 K9 Y6 J，e4的，用1/2体积的原来的匀浆液氯化锂 - 尿素溶液重构沉淀后，加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇在室温下15-30分钟，而不是当摇组合，4000克的离心5分钟。
3 D2 V“I1??（?* D5，和水的上清液中，添加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）和2倍体积的乙醇??，-20℃下进行1小时，5000克离心。
？L4“Q4 U L：* K％Z $？ （E6，70％的乙醇沉淀，洗涤一次，并在真空中干燥3}; R0 [/ Q'G9 Q
是RNA，RNA溶解液溶解沉淀物，分装，保存于-70℃。
0 F。 X％R（H％B7?的
！ Y7 J5 U $ C'|）[％?！ J3e：Q蛋白酶 - 热酚法|“^ 0 B *）P3 S * C4 B4 H4升
本发明的方法是适合的病毒RNA的提取
* I（I + B＃R！K测试试剂：
$？ 4 [7 H9`）的蛋白酶K（终浓度为50ug/ml），J1，J5 P L6 V / T7 [/ I
2，2×缓冲液：1％SDS的？的20mM Tris-HCl（pH值7.6）中？ 0.2MnaCL9 H，P] Y + \ $ Z）O
测试程序：＃W3 [$] 5 Y V8 G1
1，纯化病毒溶液中加入等体积的缓冲液，蛋白酶K，在37℃下40-50分钟。
- K0 - P / E'Q-Z7?G0 M＃{＃D2，加入等体积的65°?预热的酚溶液，轻徭薄赋，光5分钟，然后在65℃徭培养。
？W！ `; W（E：酷睿i3 ^ 3，离心，取上清液，氯仿萃取时间。（Z0 D; J2 7米+ D2 Q＆X?
4，取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）和2倍体积的乙醇??，-20℃下进行1小时的离心分离，5000克（万克，10分钟）。
7 [/瓦特，氢气D6 U $ k5的，70％乙醇洗涤沉淀物一次。在真空下干燥。
％A5 Y; {（W％3 * Y O E）P6 RNA溶解液溶解沉淀RNA，分装，保存于-70℃。对策植物RNA提取过程中难以
对策植物RNA提取过程中难以
）O5 B7 D / Q3 _酚类化合物的干扰及对策：
？A9 D * Z3 K？ 7 W许多植物组织中，特别是水果（如苹果，樱桃，李子，葡萄等）的植物和树木，植物，含有丰富的酚类化合物。酚与植物生长和增加的含量。因此更容易从一个年轻的植物材料的RNA提取。此外，针叶树植物在落叶植物的叶子中的织针的多酚含量要高得多。氧化后匀浆焦黄的加深，在植物材料匀浆的酚类物质将被释放，和氧化的程度的增加，这种现象被称为褐变的影响（BROWNING效果）。酚类化合物（例如，醌类）与RNA稳定地结合，可被氧化，从而影响的RNA的分离和纯化。纽伯里与酚类的总量中的材料没有发现RNA提取的难易程度之间的相关性，因此，并非所有的酚类化合物的影响RNA提取。但一般认为，所谓的“缩合单宁”聚合物多羟基黄酮醇类物质（如原花青素物质）是影响RNA提取的一类化合物。除去酚类化合物的一般方法是在初始阶段的提取，以防止它被氧化，然后分离和RNA。 9 B0 S！} 0 U6 | 9 K / L！ V“V G1?/ @
防止被氧化的酚化合物的方法：
的“V y的，A4 K7 N /还原法Z1：一般，在提取缓冲液中加入（ - 巯基乙醇，二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸？防止酚类的氧化，有时中提取溶液（ - 巯基乙醇的浓度可以最高为2％（ - 巯基乙醇，等也可以被中断以便苏由多酚氧化酶的失活的二硫化物，即添加到沉淀RNA过夜（ - 巯基乙醇（终浓度为1％），可以防止氧化的在这个过程中的硼氢化钠（硼氢化钠）的酚类化合物是可还原的醌的还原剂，用提取缓冲液，因为它处理棕色的消减，醌化合物可被还原成的多酚化合物。
＆H Z。 P +?＆T％T5 G＆G1 M-P / Q！ U2，螯合剂的方法：螯合剂的是聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）和聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP），CO-N =基团包括多酚化合物，强的结合能力的结合能力与多酚化合物的芳香环的数目增加羟基加强。原花青素物质包含许多在芳香环上的羟基基团，其中可形成稳定的复合物与PVP或不溶性PVPP，使得原花青素的物质不能为多酚氧化酶的酶底物被氧化，并且可以提取步骤后，除去。随着PVP去除多酚时pH值是一个重要的影响因素，结合多酚PVP pH值8.0，更迅速地降低[11]。当原花青素是单独使用时的更大的质量PVPP无法以除去所有的这样的化合物，因此需要与其他方法结合使用。
？p％的N0瓦特/ t7的r3中，Tris-硼酸盐的方法：如果提取缓冲液含Tris-硼酸盐（pH7.5的），其特征在于，所述硼酸可以根据带*氢与酚类化合物形成复合物，从而抑制酚类氧化与RNA结合。这种方法是非常有效的，所以在提取缓冲液中的溶液中加入Lбpez-Gбmez不再是其他还原剂。的Tris-硼酸浓度过高（> 0.2M）将影响的RNA的回收率。
＃P8] 0 ^ 8 K3 a4中，牛血清白蛋白（BSA）（法国）：物质和BSA的原花色素可产生类似的可溶性或不溶性的复合物的形成之间的抗原 - 抗体相互作用，降低了材料和RNA的结合的原花色素的机会，从而提高了产率的RNA。 BSA和PVPP合并提取液效果会更好。由于RNA酶往往含有BSA的要加入在使用肝素抑制核糖核酸酶的活性。 ?＃H / Y（P7 Q）J4）G * W1 G8升
5星，的丙酮：Schneiderbauer冻结的云杉，松树，山毛榉等，从-70℃的丙酮萃取植物材料与抛光后，可以有效地分离成高品质的植物材料的酚醛化合物的丰富的RNA。 @ +？ - X / V9 Z8 T8 H：B3?！白c
去除酚类化合物：
＆Z＃H）G0 H＆$ I1 N F L9 N的李+和Ca2 +沉淀RNA的方法可以将未氧化的酚类化合物清除和PVP，不溶性PVPP或BSA结合的多酚类物质可以直接通过离心分离除去，或曼宁，使用高浓度的2 - 丁氧基乙醇（50％）中，以沉淀RNA除去苯酚和氯仿萃取。多酚，溶解在2 - 丁氧基乙醇除去，然后含有50％的2 - 丁氧基乙醇的缓冲液洗涤RNA沉淀他认为甚至多酚被氧化，其氧化产物仍然可以被溶解在高浓度的2 - 丁氧基乙醇溶液中以除去残留的多酚删除此外，没有必要再使用硼氢化钠处理。 C6 Y8 A1 SV：？2
多糖的干扰及对策：6 I-B3 R4?$ T＆O
？多糖的污染是提取植物RNA经常遇到的另一个棘手的问题。植物组织往往是富含多糖，许多的物理化学性质和RNA的多糖是非常相似的，它是难以将它们分开。去除多糖而RNA是还裹着可移植性路程，导致RNA产量减少; RNA沉淀，也产生多糖的凝胶状沉淀物，例如含有多糖类的RNA沉淀不溶于水的，或溶解生成的粘稠溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，从而污染的多糖的RNA样品不能用于进一步的分子生物学研究。在传统方法中，通过SDS-盐酸胍处理可以部分地去除一些多糖;氯仿萃取可以移除一些多糖由苯酚的存在下，高浓度的Na +或K +离子的条件下;?? LiCl沉淀的RNA也可以是多糖的一部分留在上清液中。然而，即使通过这些步骤仍会发现有相当数量的多糖和RNA混合在一起，所以需要使用更有效的方式来解决污染问题的植物RNA分离和纯化的多糖。
7 ['X / E，d8上×（沸点（| 9 C＆n与低浓度的乙醇，以沉淀除去多糖多糖是一种更好的方法提取RNA或溶液缓慢地加入到无水乙醇至终浓度10％至30％，并且可以使沉淀的多糖，而RNA保持在溶液和乙醇的溶液中加入，通常是在植物材料匀浆Lewinsohn RNA萃取从裸子植物的木质茎，在一个统一的在乙醇中的浆料的上清液加入到最终浓度为10％的情况，以沉淀多糖，但Tesniere，从葡萄浆果组织中提取RNA，通过CsCl超离心，和乙醇沉淀后的RNA溶液中加入最终浓度为30％的乙醇的沉淀多糖，和进一步纯化的RNA样品。
！ I5 B5米* Z9八国集团M4? - N / D另一个常用的方法是醋酸钾沉淀多糖的方法。加入1/3量的5 M醋酸钾（pH4.8）解决方案巴赫卢勒云杉组织匀浆中提取的RNA沉淀多糖;安斯沃思在鲁梅克斯植物花卉组织RNA提取时加入1/5体积的5 M钾乙酸乙酯（pH4.8）溶液。 Hughes等人在棉叶和花粉RNA的提取被添加到1/3体积的8.5M醋酸钾（pH值6.5）溶液匀浆为了除去多糖等杂质。的植物材料的RNA提取物中，上述两种方法组合使用。的这种Lбpez-GбmezRNA提取芒果中果皮时，将匀浆液中加入0.25体积的无水乙醇和0.11倍体积的5M的醋酸钾溶液以除去多糖杂质。 Su等人在除去多糖藻酸盐，单独使用乙醇或醋酸钾是无效的，并只使用最好的结果的组合。
6 C9 | 5 Q1 B9 ??[5 L1 S + N方这样的缓冲液中含有高浓度的NaCl有助于去除多糖。 Chang等人在提取松树核糖核酸，NaCl浓度为2.0M和1.0M的缓冲溶液中，和氯仿萃取和乙醇沉淀RNA与多糖的分离的RNA。曼宁是萝卜种子和其他材料，苯酚提取，上清液稀释的Na +离子的浓度调节至80毫米，然后加入0.4体积的2 - 丁氧基乙醇沉淀去除多糖。 3 B1 H＃M'{+ {0 U％U，K2 @，V
蛋白质杂质的影响和对策：$ _at_ - G5 O（F1 S9 _2 V * G2 N / ^
？蛋白RNA样品的污染是一个重要因素。核糖核酸酶和多酚氧化酶是蛋白质，从而获得完整的，高质量的RNA必须有效地去除蛋白杂质。传统的方法是，以抑制在冷冻条件下活性的RNase等磨碎的植物材料;提取缓冲液中含有的蛋白质变性剂，如苯酚，胍，十二烷基硫酸钠，十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），这样可以使在匀浆蛋白质的变性，聚集，一些蛋白酶K降解蛋白质杂质。五月进一步除去蛋白质，用苯酚和氯仿萃取。 T7五（F1 J9 @ + E
？Wilcockson不同的溶解度，他们可以使用高氯酸钠溶液中的蛋白质和RNA分离。 70％高氯酸钠溶液，大于该蛋白质的溶解度的RNA的溶解度，从而大多数的蛋白质沉淀。随后通过离心分离的上清液中加入两倍体积的无水乙醇中，然后将RNA可以安顿下来，并可以溶解在70％的高氯酸钠溶液，残余蛋白保持在上清液中。这可以除去大部分的蛋白质。
3 QE / \ * I“A＆@次生代谢产物的影响及对策:: N3）N F K＃N，P F6 H0 J2 A0 {
？另一个困难是从植物组织许多高等植物组织，尤其是成熟组织可以产生一些水溶性的次级代谢产物中提取的RNA的质量，这些次级代谢产物很容易与RNA结合和RNA提取，满分阻碍分离的生物活性的RNA。这些次级产品不能确定什么具体的物质，但也没有特别的方式来解决这个问题。贝克休斯等选择性沉淀Chirgwin氯化铯梯度离心分离和纯化的松树种子，成熟松树针叶植物组织RNA中艾弗森的RNA恢复。 （M S5 O％F！H-Q * \（“`（}
？难易其他生物材料的植物组织中，特别是高等植物细胞内外的复杂多样性的组合物，使植物组织RNA提取阶段。通常，在实践中发现，即使同一种植物的不同组织RNA提取方法不同，不同的植物材料包含某种干扰因素有很多，不同的RNA提取方法可能适用，即使是同一种植物的相同的组织材料，但是从不同的基因型的植物，RNA提取的方法可能不相同。因此，对于一个工厂或组织，其相应的RNA提取方法必须经过的探索和实践，以建立。 ＃S0一个＃G7 L3 S＆A
？随着植物分子生物学研究领域的扩大，我们可以肯定地说，出现了新的困难，但也RNA提取植物材料的过程中，作为其研究的基础上，不断探索和经验积累，科学家们将很快解决这些困难，并为植物分子生物学的发展铺平了道路。一些特殊的植物RNA提取方法
一些特殊的植物RNA提取方法
$ E * [U（E％H'多酚植物RNA提取：J！D，2 V（R! B＆?
？？苹果棉花多酚植物RNA提取采用TRIZOL一般没有来。验证此方法是有效的，所提取的RNA的纯度没有特别高的，但作为北方足够。 6 J＆D2 U（\ 6 W8 _＆O4 E1 X1吨
试剂：
＃S7 S8?！ R＃W1 Y＃克提取缓冲区200毫升的：氯化钠1.1688克100毫米的Tris2.4228克10毫米（的Tris-HCl，4.0）EDTA的5.8450克10mM的SDS2.0000克1％NaOH溶液调节至8.0，并设置到200毫升，再加200ulDEPC解冻。 * J）; T2 @）T4 W'F
测试步骤：
！ ?A0 I * C（W5 S * A'的W11.5毫升管的冷冻液态N2的吼加入0.1克样品，加入500UL苯酚 - 氯仿，然后加入500UL提取缓冲液，剧烈振摇1分钟，放置在冰上5分钟。 “F3 S0 V5 @ 0 S7 I1?的
2，4 12000rpm进离心15min后，将上清液转移到新的试管中，添加氯仿异戊醇提取时间。 ）H'L7 D＃D“Y8 @
3，取600ul异丙醇-20℃沉淀20分钟。
＆W：M2 R：I4 \ L＃J4，12000转离心10min。
！ IY \ 8 b7的A5中，将沉淀物用乙醇（70度）。
？K！ T. D1 [0 w +？）_0 D5？ 6，8000RPM 5分钟。
“A，Y＃}'F（`5} 6我+ N！X7，沉淀干燥，，溶解30ulDEPC水。^ 0 QR +`5 J（N'['M9中号
＃M / R3 O2?！ T6 Z $`1 M＆E。 ^
银杏等木本裸子植物的RNA提取方法：A I＆V！ H0`？ ?
？银杏，香和其他木本裸子植物，次生代谢物和多糖，分离和纯化的RNA干扰RNA提取的质量和产量，严重影响了酚含量，分子生物学实验的开展带来阻碍。目前，RNA提取方法的许多传统的Trizol试剂盒，SDS和其他方法提取银杏RNA，蜀郡张等人（1993年），CTAB法提取RNA的质量也较差，的退化也是非常严重。改善其的提取步骤，以获得更高质量的银杏RNA样品。 / S4我* V K8 S）x
检测试剂：M（Q＃E7 N3吨;`＃I M（[
1，1M三：12.11克?里斯被溶解在60米L水，用浓盐酸PH8 0.0，体积LOO毫升无菌DEPC水溶解使用。
？`4 C9 {）P2 \ 4 T2 M EDTA，500米：18.61克?DTA“H 2O80米升的水，搅拌至溶解，用NaOH pH值调至8.0，定容至100ml。; V＃X G4 M＃Q3 C5 P * J！H4 Y！
3，10摩尔/ LLiCL的了：42.4 gLiCL 100毫升水溶解即可。 9 I）@一'\＆W + C P * G
如图4所示，提取缓冲液（DEPC处理）：2％CTAB（蛋白质变性剂）0.2％PVPK 30（除去的多酚）100米摩尔Tris-HCL（pH8.0）中25米M EDTA（金属螯合剂混合物）2.0M的氯化钠（去除多糖和CTAB）与方法：10 mL的1 mol / L的三，PVP2克，2克CTAB，5ML 500毫米EDTA，11.7gNaCL，将音量设置为100毫升。 ）O + \ 5 E！ X，O＃A（M + P8 H * K9 N0 q
5，亚精胺（提取液中加少量）（RNA酶抑制剂）
＃J9 G6 O / H（U'D6，4％的的稀疏乙醇（添加）提取（去除多酚）'D E，D（J. K $ Z！O9 f
7，氯仿和异戊醇（24：1）（萃蛋白质））U）A +] 4 \＃Q
8，10 MLiCL（沉淀物大分子RNA）
7 M +）G4 J4 m5的C0的f-\ 9，SSTE（溶解RNA）的1.0M的氯化钠0为1m10米MTrisHCL（pH为8）法：氯化钠2.9克，0.25毫摩尔EDTA（pH8.0）中，5％SDS克SDS，0.5毫升1个三L 500毫米，100 U EDTA，pH值8.0，定容至50 mL。 。 M5 Z + J3 X0 V＆\ 6 E7?＃R
测试准备：_5 Z9}“F％Q6吨
的灰浆和玻璃器皿包裹在铝箔烘焙温度为200℃或以上的至少2小时，或180 * C高温烘烤4小时信息。 X7 N3 W，W2} 9 M
2，塑料制品（提示和管）最好的新的和裹在报纸，121'C高压灭菌器，消毒40分钟，或两次121'C高压釜每次灭菌20分钟，然后烤箱烤千。
X * F +?，V7}。 A3，所有的溶液的制备，加DEPC水DEPC UJ的浓度为0.1％，在37℃培养过夜，1211C高压蒸汽灭菌40分钟。液（Tris，因为它是没有用DEPC，所以的Tris DEPC-处理的水溶液中制备后灭菌处理，。）
）X＆B {％E ^？＆F：S0 q检验程序：“Y6 U +`C * \ X2一个＃R
[据文献（蜀郡张，1993）CTAB法，小的改进。 】
F ^ + E9 I＃H / Q7 M * A *] 1，4毫升提取物加入到lOmL离心分离机的加热管C卜650C水域。 $ D +？ 4 W7 \ 3 J：W，M
2，在研钵中，用液氮冷却，在研钵中的抗氧化剂的PVP加入少量，采取1克低温冰箱银杏，迅速放置在研钵中，不时加入液氮在研磨过程中，为了防止叶片熔体充分研磨紧接添加到预热的提取缓冲液中，并混合与手的功能。 C4我+ L / Z * C5?）V
3，65℃，1分钟，冷却至室温的水。
（N2 _at_）U：S，{9 M“E8 F4中，通过添加量（4毫升）的氯仿：异戊X17（2 = L：1）混合，10,000 rpm下，40C，10分钟。
（H6 P O1 Y8 P＃？5星，仔细的上清液中，加入等体积（4毫升）仿：异戊醇（24：1），并混合，10,000 rpm下，40C，离心10分钟。{＃K / Z5? ：X：V1 x
6，取上清液，加入1/4体积IOMLiCL，混合，4℃沉淀过夜，然后10000RPM离心20分钟。
7×P4 O6 Z1 D！ [8} 7，干燥，溶解沉淀500U?SSTE 1.5M大号离心管中放了一炮。等体积的氯仿：异戊醇混合，1万转，40C，离心10分钟。
，H2 b7的C1e* [6 R4的c8的离心拉伸上清液，加两倍体积的无水乙醇，-70℃沉淀至少30分钟，或20℃的沉淀物2小时。 “W * C'Y1 P-T5 K表）^`
9，12000rpm进，40C，离心20分钟，用70％乙醇洗涤两次，干燥沉淀去。 1×，S * X0 V“Y6 F /升
10，40 U LDEPC处理水以溶解沉淀物，得到的RNA样品。 8 F2 C-S4 R3 O9 R4 T E＆{
11，除了电泳，紫外检测，RNA-70℃冰箱备用。
？Q0 O7 V.] 9 x，{1我：__
！ U * X1 M5 G9一个（W％U改进克拉普提取：
1 R）R＃S3?。 Q1诉W测试试剂：
C7 Z1 ^）J5 A＆F＆W（K D1，RNA提取掖：母液：4mol异硫氰酸胍的20毫摩尔EDTA 20毫摩尔MES pH值7.0。工作液：取400毫升母液加入1.7毫升2-ME贮存在4 ℃，储备/ I $ E. RS％Z
2，RNA重新悬浮液：氯化锂10毫摩尔乙酸钠的2mol调整最终体积为250ml，pH为5.2，灭菌后，存储在4℃的条件下的使用。 2 U J1 S9 V8一个。 ?
测试步骤：
）O / O型，L＃q构成-D8 V）U1，取新鲜植物材料0.5?1g和冻干。如果有必要，可以添加至0.2g砂磨一起，拌匀，然后加入10ml RNA提取掖。 7 N Q：B“S N9 B！J $ü
2，4℃，在8000RPM离心10min的条件下，上层水相转移到一个干净的离心管中，并加入等体积的苯酚/氯仿萃取除皱离心10分钟，在4℃的条件下，8000RPM。
1，N：K +] 3 R A7`3，将上清液转移到一个干净的离心管中，将上清液1（添加调匀10毫升氯仿洗涤，然后10ml氯仿中，在4℃的条件下，8000RPM离心10min 。）
$ P + Y，P / ^ - W / E“G”K0 Y：[4，小心地将上清液转移到另一个干净的试管，加入1/10体积3摩尔乙酸钠和2倍体积的冷乙醇，-80℃下降水两个小时的条件：T＆M8 C-W5一O1 O！
5，在4℃，8500rpm离心30分钟的条件下。小心弃去上清液，将沉淀再悬浮在的RNA再悬浮，并在4℃下放置1小时的条件下。 9 B7 Z＃K4 V（同期L8 Q0 A8?）I％|
6，4℃的条件下，8500rpm离心10min。丢弃上清液DEOC的沉淀物溶解在适当体积的处理过的水。测试后的包装，保存在-70℃的条件下。
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侧耳倾听是谁的作品?
答：word=mp3, admin.iqbos/...E$.mp3,,[%C3%CE%BB%C3%BD%D6%C9%D9%C5%AE]&gate=1&ct=134217728&tn=baidumt,music 梦幻街少女主题歌&si=;;;0;;0&lm=16777216&mtid=2&d=4 补充: LZ这素原唱的喏、咱和原视频比较过的了、不信LZ可以去听下 《侧耳倾听》的作者是谁?可以大概介绍一下吗? 近藤...
飞的英语单词和风筝的英语单词
答：飞fly 风筝kite 放风筝fly a kite
求:中国古代对联下联
答：上联:世事如棋,让一着不为吃亏 下联:人生若梦,退一步海阔天空[老对]上联:世事如棋,让一着不为亏我 下联:人生似歌,唱几首平安喜乐[新对]上联:诚实守信立根本.下联:廉洁奉公为百姓 勤政爱民得民心 贪污腐败失民心 业精于勤荒于嬉;行成于思毁于随 ...
求一些好听的日文歌
答：《Ah Merry-go-round》(BERRYZ工房的清水佐纪嗣永桃子唱滴~~~这张专辑里我最喜欢的歌··妩媚的声音吖HOHO)《YELL》(Exile放浪兄弟的歌~~听了还蛮感动的曲风捏···嘻嘻~有点圣诞风)《HOLY NIGHT》(Exile的~~同样有圣诞感觉的歌···浪漫FEEL的情歌哈·~)《旧日时光的山丘》(可能听过矢野真纪的人并...
非J家的日本明星
答：berryz工房 ℃-ute Buono!松浦亚弥 安倍夏美 铃木爱理和菅谷梨沙子作为后辈虽然年龄较小，但人气惊人的高～http://tieba.baidu.com/f?kw=%D4%E7%B0%B2%C9%D9%C5%AE%CF%E0%B9%D8%CC%F9%B0%C9 以上地址为早安少女相关贴吧，有关H！P旗下艺人的贴吧都有，欢迎观摩和了解宝贝们～...
辐射新维加斯28以后到50级PERK代码
答：垃圾时间（Junk Round）需求：等级2、运气6、修理45 说明：可以用废金属和锡罐制作弹药。（可以制作.308/.37/.5.56/.44等大部分种类的弹药，对废金属和锡罐需求较大，估计只在死钱里有用）代码：xx00fb6a 旧世界美食（Old World Gourmet）需求：等级2、耐力6、生存45 说明：吃小吃时少获得25%...
求卡内基成功学MP3英文版!给500分!
答：but the lightning was too late As the rain came down on the crimson ground It was the hidden hand of fate And a crowd of people gathered round, but Billy couldn't wait Paul J. Mitchell Carnegie Mellon University pm3z@andrew.cmu.edu Pittsburgh, Pennsylvania 我只有歌词 ...
函数公式=ROUND(D21/12,2)什么意思
答：意思是：ROUND保留函数格式：=ROUND(某项值，小数点后位数)解释：设定位数后面的有效值四舍五入。举例：如在A1单元格输入12.13512，我们在B1输入公式=ROUNDUP(A1,2)则显示为12.14，若输入=ROUNDUP(A1,3)则显示为12.135ROUNDUP进取函数格式：=ROUNDUP(某项值，小数点后位数)解释：设定位数后面的有效...
请教Excel高手:Sheet1中是全部学生姓名,Sheet2是部分学生各科成绩,如何...
答：在E3单元格中写入公式“=IF(D3<0,REPT(〃n〃,-ROUND(D3*100,0)),〃〃)”,然后选中它并拖动“填充柄”,使E列中所有行都能一一对应D列中的结果;接着在G3单元格中写入公式“=IF(D3>0,REPT(〃n〃,ROUND(D3*100,0)),〃〃)”,也拖动填充柄至G14。我们看到,一个没有动用Excel图表功能的纯文本...
